超滤离心管使用的是再生纤维素膜,这种材质是蛋白吸附较低的超滤膜。但是对于一些疏水性蛋白或非极性蛋白,它们和膜的非特异吸附可能会增强,对于这种情况,可以尝试在实验前对超滤管进行封闭处理,也可以尝试换成Amicon Ultra0.5或2来进行实验,通过减小膜面积来降低非特异性吸附。超滤膜含有微量甘油。如果此成分干扰分析,可用缓冲液或Milli-Q水预清洗。如果干扰仍存在,用0.1N NaOH清洗,然后用缓冲液或Milli-Q水再次清洗后甩干。使用超滤离心管时应注意避免振动或震动造成样品混乱并影响分离效果。绍兴10K超滤离心管定制
超滤离心管使用方法和注意事项:1、选择合适的超滤离心管,主要考虑MWCO和浓缩体积,通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量为35kDa,就可以选择10kDa截留分子量的超滤离心管。若目的蛋白分子量为10kD左右,则可以用截留分子量3kD的超滤离心管。2、新买来的超滤是干燥的,使用前加入MilliQ水,水量完全过膜,冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超过管顶的白线为准。操作要轻,加入蛋白液前,超滤离心管需要插在冰上预冷。3、质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快,否则直接损坏超滤膜。开始离心超滤(离心机预冷至4度)。不同离心机的转速rpm换算成g之后,有所不同。离心机的加速度调至低档,减小对膜的压力。注意,一定要等离心机达到目的转速之后,方可离开离心机,否则离心机出问题时,无法*时间处理,后果不可预测!杭州超滤离心管能干什么使用超滤离心管时应注意避免过度旋转或操作不当导致样品失效或污染,并及时更换膜和其他配件。
回收浓缩液主要有两种方法:一种是用吸管直接吸取并回收,另外一种是将离心管放入离心机反甩,将浓缩液甩入回收帽中,加盖保存,因此超滤管常配合离心机使用。超滤管主要应用有以下几个方面:1.浓缩含有抗原、抗体、酶、核酸(单株或双株DNA/RNA样本)、微生物、洗出液和净化样本的生物标本。2.净化组织培养基提取液和细胞溶解液中的大分子成分,从反应混合页中去除引物、链接或分子标记,在HPLC之前去除蛋白质,3.除盐、更换缓冲液或渗滤。根据其材质的不同总体可以分为塑料和玻璃的,塑料的离心管用的较多,又可以分为PP、PC、PS等,根据不同需要,生产厂家会选择不同的塑料材料来进行制作。
一般来说,超滤的回收率可达90%以上。样本损失大多是由于滤膜表面和容器表面的非特异性吸附引起的。因此,选择口碑好、优良品质的浓缩离心管非常重要。作为过滤方面的老牌公司,提供了多种浓缩离心管,可对50 μl到60 ml的样本进行高效的浓缩和脱盐。它配备了(改良的聚醚砜)膜,确保低的非特异性吸附和高的回收率。当然,这个的前提是你选对了浓缩离心管。浓缩离心管,适合处理不同体积的样本。你可以根据你的样本量来选择。不过,如果样本浓度低体积大,可以选择较小容积的浓缩离心管多次重复加样离心。一旦样本体积确定,下一步就是选择适当的MWCO。对于蛋白质而言,建议所选滤膜的MWCO是欲截留分子大小的1/6-1/3。通常,截留孔径越小,流速越慢,但截留比例更大。超滤离心管通常有不同孔径大小的超滤膜供选择,以便过滤出不同大小范围内的目标分子。
超滤是大分子脱盐、浓缩较方便的方法,重复性好,得率有保障,已经在蛋白、抗体、病毒、核酸、囊泡等样品制备中建立标准操作;在目前大热的外泌体制备中也已经成为主流方法。超滤管采用离心方式快速处理样品,是很多科研小伙伴们每天要用到的基本装备。但是,在默克生命科学团队推出超滤管中文说明书(AU0.5/4/15)之前,我们发现近90%的使用者在选择和使用过程中因为缺乏必要信息而没有获得较佳体验,更重要的是,宝贵的样本会遭受本可避免的损失!如果目的蛋白是120kDa,请问应该选择的超滤管规格是100k,50k,还是30k甚至10k?你采用的是1/2,1/3抑或1/6算法?这些没有统一的说法,是因为不同厂家的膜的截留分子量的定义不同。超滤离心管的选择取决于被过滤的溶液或混合物的性质及所需的纯度和体积。绍兴10K超滤离心管定制
超滤离心管适用于从细胞培养基、血浆、尿液等样品中分离蛋白质、核酸、多糖等大分子化合物。绍兴10K超滤离心管定制
超滤离心管是否可以重复使用:离心超滤管通常不能消毒再次性使用。由于单管价格并不便宜,不少人尝试重复使用----经验是用蒸馏水清洗膜表面多次,离心一次到两次,那种可以反向离心的小管子可以加蒸馏水浸泡后反向多离心一次,会好些。可重复用于同一样品,不用时可用蒸馏水浸泡,但是要防止细菌污染。不同样品就不要混用了。有人说泡在20%酒精、1N的NaOH(氢氧化钠)中,防止长菌,而且防干,只要超滤膜侵了水,就不可以再让它干,但也有人说会破坏膜结构。反正厂家一般不支持重复用。多次重复使用会堵塞滤膜上的孔径,甚至出现漏液现象,影响实验结果。绍兴10K超滤离心管定制
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