脑脊液外泌体提取

虽然外泌体在疾病的诊断上有天然优势，但在临床应用上仍有一些限制：外泌体的提取方法金标准仍然是差速离心法，但这种方法费时费力且提取效率较低，难以进行临床推广和应用；而商业化的试剂盒质量参差不齐，往往导致提取物杂质过多，且其售价较高。外泌体的定量是采用颗粒浓度定量，蛋白浓度定量，亦或是核酸浓度定量，目前仍存有争议。由于传统的内参并不适用于外泌体，在实时荧光定量PCR检测靶分子含量时内参的选择尚没有统一的标准。外泌体分子标志物的研究还处于初级阶段。目前外泌体研究的整个流程中成本都很高。外泌体能够影响级联反应的每一步，因此可作为病灶治理的靶点。脑脊液外泌体提取

外泌体在神经系统中与神经回路的控制相关，同时各种神经退行性疾病的致病蛋白还可以通过外泌体释放到细胞外并传递到其他细胞，与病情发展密切相关。病细胞释放的外泌体含有许多与血管新生和免疫逃逸相关的分子，构建适合病细胞生长的微环境，促进病细胞的发展。另外，病细胞来源的外泌体上粘着分子的表达形式决定着症状向身体部位的转移途径。近，有报告指出脂肪细胞释放的外泌体对肝脏的遗传基因表达有控制作用。许多病毒利用外泌体的产生路径传播细胞，受病毒传播的细菌和寄生虫通过外泌体控制其他受细胞传播的细菌、寄生虫的活动。研究所提取试剂盒价钱人体内多种细胞及体液均可分泌外泌体，包括内皮细胞、免疫细胞、血小板、平滑肌细胞等。

通过对28例前列腺ai症患者和19例正常人尿液外泌体中的miRNA进行深度测序分析，发现两种miRNA(miR-196a-5p和miR-501-3p)在前列腺ai患者组明显下调，表明尿液外泌体中的特异性miRNA可能作为前列腺ai的新型生物标志物。Khurana等［100］将研究对象由miRNAs扩大至多种类型RNA，通过对慢性肾病患者尿液外泌体中各类RNA进行系统研究，在慢性肾病患者组中识别出30种明显差异的lncRNAs，表明尿液外泌体中的lncRNAs具有作为慢性肾病早期诊断标志物的潜力。Skotland等的研究则表明尿液外泌体中的脂质能够作为前列腺ai的新型标志物，3种脂质标志物结合使用能够有效提高对前列腺ai的诊断灵敏度(93%)和特异性(100%)。

目前，在各种健康与疾病模型中都发现，外泌体通过分子信息传递扮演着重要的角色。外泌体还越来越多地被认为是疾病的生物标志物和预后因子，具有重要的临床诊断和治理意义。除此之外，它们还有潜力被用于临床，作为基因和药物递送的载体。健康人和多种疾病的患者会将含有不同RNA和蛋白质成分的外泌体释放到体液循环中，因其特殊性，外泌体可以作为生物标志物来对疾病进行检测。例如，从血液或尿液中分离的外泌体可以用作病症、心脏病的诊断和预后的指标。外泌体存在于组织样本中，如脑组织、肌肉组织、脂肪组织等。

通过改变外泌体的溶解性或者分散性,可以将它们从体液或细胞培养液中沉淀出来。常见的方法是使用聚乙二醇或凝集素来沉淀样品中的外泌体。聚乙二醇是一种水溶性非离子化合物,不含水的聚乙二醇可以通过“劫持”水分子增加疏水性蛋白和脂质分子的相互结合力,从而迫使其脱离溶液,进而在低速离心条件下发生沉降。凝集素是一种具有高度特异性的碳水化合物结合蛋白,可通过与外泌体质膜糖蛋白上的糖链结合来改变外泌体的溶解性。此外,还可使用鱼精蛋白、醋酸钠、有机溶剂沉淀等方法进行沉淀分离。外泌体不只可作为疾病诊断的生物标志，而且可作为天然的药物传递载体。鼻腔灌洗液外泌体miRNA芯片

外泌体又存在检测时需使用大量外泌体和难以检测到低表达水平的标记蛋白。脑脊液外泌体提取

研究者利用电穿孔法对外泌体进行DOX的负载，进行体内抗中流效果的研究。实验结果显示，负载DOX的iRGD肽靶向性外泌体对中流的抑制效果远优于单纯的DOX。直接静脉注射DOX，其不仅水溶性低，而且容易使DOX与血液中的蛋白结合，从而被网状内皮系统识别捕获，起不到理想的抗中流效果。而用iRGD肽靶向性的外泌体保护DOX，可以提高DOX水溶性，避免被网状内皮系统捕捉，提高靶向性，从而降低由于用药过量和非靶向性引起的毒性，起到更好的抗中流效果。脑脊液外泌体提取

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