外泌体的相关成分:1、外泌体的膜同细胞一样,是磷脂双分子层。2、外泌体膜含有MHC-1/2蛋白,能绑定特异性的肽链。3、外泌体膜中有跨膜蛋白PGRL、LAMP1、LAMP2。4、外泌体膜中有膜转运融合蛋白annexins、RAN、GTPases。5、外泌体膜上有脂质筏Chol、ceramide、SM、PC,限制膜流动,参与包括跨膜信号转导、物质内吞、脂质及蛋白定向分选的多种功能。6、外泌体中含有核酸,包括miRNA、DNA、lncRNA、mRNA;同时还有一些蛋白、脂类也能被包裹到外泌体中。7、与外泌体产生相关的重要分子:Ral、ARF6、PLD2、RAB家族。8、一些物质进行外泌体中是特异性的:如hnRNPA2B1能结合lncRNA或miRNA特异性的序列(GGAG/CCCU),进行主动包埋。超速离心是目前分离外泌体的主要技术。外泌体由各种类型的脂质和蛋白质组成,这些脂质和蛋白质衍生自形成外泌体的亲代细胞。宇玫博生物dio
外泌体的提取分离方法:1、PEG-base沉淀法:聚乙二醇(PEG)可与疏水性蛋白和脂质分子结合共沉淀,早先应用于从血清等样本中收集病毒,现在也被用来沉淀外泌体,其原理可能与竞争性结合游离水分子有关。利用PEG沉淀外泌体存在不少问题:比如纯度和回收率低,杂蛋白较多(假阳性),颗粒大小不均一,产生难以去除的聚合物,机械力或者吐温-20等化学添加物将会破坏外泌体等,因此发表文章时易受质疑。2、试剂盒提取:近几年来,市场上已出现各种商业化的外泌体提取试剂盒,有的是通过特殊设计的过滤器过滤掉杂质成分,有的则采用空间排阻色谱法(SEC)进行分离纯化,也有的则利用化合物沉淀将法外泌体沉淀出来。外周血外泌体提取试剂盒报价需要开发大规模生产质量可控的外泌体并快速纯化外泌体的技术和策略。
Exosome,中文名外泌体,是一种能被大多数细胞分泌的微小膜泡,具有脂质双层膜结构,直径大约40-100nm。尽管外泌体较初在1983年就被发现,但人们一直认为它只是一种细胞的废弃物。然而较近几年,人们发现这种微小膜泡中含有细胞特异的蛋白、脂质和核酸,能作为信号分子传递给其他细胞从而改变其他细胞的功能。这些发现点燃了人们对细胞分泌膜泡的兴趣。2015年,随着精确医学概念的提出,越来越多的人开始关注如何能做到疾病的精确诊断和诊疗。外泌体作为一个新型的研究热点,由于它在体内存在的普遍性和获取的便捷性,已经成为了疾病诊断诊疗的潜在有效方式,在精确医学发展上有着光明的前景。外泌体的提取的方式:超速离心法。
外泌体生物学功能:1、在心血管系统中,据报道,源自人胚胎干细胞(ESC)的间充质干细胞(MSC)外泌体可减少小鼠和猪模型中的心肌缺血和再灌注损伤;2、在免疫系统中,据报道趋化因子受体CCR5通过外泌体在细胞之间转移是细胞人类免疫缺陷病毒传染的一种机制;3、在中枢的神经系统(CNS)中,外泌体的作用是消除废物并介导大脑活动,从而阻止神经退行性疾病的发病机理;迄今为止,尚未完全发现调节外泌体-细胞结合的途径。然而,比较明显,其结合过程从外泌体识别受体细胞PM上的特定受体开始。膜受体的识别是外泌体细胞反应的基础,它可能活跃受体并随后导致相关信号通路的活跃,外泌体与PM融合或外泌体的内吞作用,从而导致蛋白质和RNA直接释放到受体细胞中。外泌体可通过其携带的蛋白质、核酸、脂类等来调节受体细胞的生物学活性。
AFC自动收集器是将qEV分离法这一过程自动化的仪器,将用来收集外泌体样本的微量离心管放置在AFC的中间转盘内,根据称重精确测量流体体积,可精确的测量到样品中每一个液滴的重量并精确测量总重量。将在空隙体积之前从qEV柱洗脱的流体收集到AFC转盘的单独中心孔中并送至废液桶,避免将不需要的空隙部分收集到微量离心管中。在提取期间,当达到设定的提取体积后,转盘会自动旋转到下一个微量离心管继续收集,到收集完成后自动停止。微滴式数字PCR技术不佳有效提高了核酸分子的扩增效率,而且由于采用微滴计数的方法进行定量,可以不依赖与RT-PCR的荧光信号和Ct值,对所测样品中的核酸分子进行一定定量。从研究上来讲并不太严格区分外泌体或微泡。外泌体可以作为“天然的纳米粒子”来进行药物递送。成都外泌体蛋白质组学
外泌体的提取的方式:色谱法。宇玫博生物dio
外泌体病毒传染:外泌体可以限制或促进病毒传染。如IFNα或APOBEC3G等外泌体载体可通过限制病毒复制或增强抗病毒免疫来阻止传染。病毒也可以劫持外泌体的生物发生机制来促进病毒的传播。外泌体可以作为一个假包膜,通过四聚体蛋白(CD81,CD9)和PtSer相互作用增强病毒进入受体细胞,并帮助逃避抗病毒免疫。病毒组分(蛋白质和miRNA)的共转运也可能增强传染性。外泌体介导的病毒转移可能参与了病毒的遗传协同和多重传染.(CMV,巨细胞病毒;HSV-1,1型疱疹病毒)。宇玫博生物dio
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