Exosome,中文名外泌体,是一种能被大多数细胞分泌的微小膜泡,具有脂质双层膜结构,直径大约40-100nm。尽管外泌体较初在1983年就被发现,但人们一直认为它只是一种细胞的废弃物。然而较近几年,人们发现这种微小膜泡中含有细胞特异的蛋白、脂质和核酸,能作为信号分子传递给其他细胞从而改变其他细胞的功能。这些发现点燃了人们对细胞分泌膜泡的兴趣。2015年,随着精确医学概念的提出,越来越多的人开始关注如何能做到疾病的精确诊断和诊疗。外泌体作为一个新型的研究热点,由于它在体内存在的普遍性和获取的便捷性,已经成为了疾病诊断诊疗的潜在有效方式,在精确医学发展上有着光明的前景。外泌体的提取的方式:超速离心法。外泌体的数量:人体中大约有1014个,近乎于平均每个细胞产生1000-10000个。细胞外泌体雾化
AFC自动收集器是将qEV分离法这一过程自动化的仪器,将用来收集外泌体样本的微量离心管放置在AFC的中间转盘内,根据称重精确测量流体体积,可精确的测量到样品中每一个液滴的重量并精确测量总重量。将在空隙体积之前从qEV柱洗脱的流体收集到AFC转盘的单独中心孔中并送至废液桶,避免将不需要的空隙部分收集到微量离心管中。在提取期间,当达到设定的提取体积后,转盘会自动旋转到下一个微量离心管继续收集,到收集完成后自动停止。微滴式数字PCR技术不佳有效提高了核酸分子的扩增效率,而且由于采用微滴计数的方法进行定量,可以不依赖与RT-PCR的荧光信号和Ct值,对所测样品中的核酸分子进行一定定量。外泌体标记示踪随着外泌体研究的不断深入,它的应用已经涉及瘤子诊疗领域、医学基础和免疫领域、寄生虫领域。
DLS使用由于粒子的布朗运动而产生的波动散射光的强度来估计外泌体颗粒的大小分布及其zeta电位。DLS样品制备方便,只需要简单的过滤,测量速度较快,需要的样品体积较少。但由于动态光散射技术是基于光强测量,散射光的强度与粒径的六次方成正比,使得当测量多种粒径的混合悬浮液时,通常会偏向于检测较大粒径产生的散射光,比较难检测到较小颗粒。所以DLS不适合对粒径分布较宽的外泌体样本的测量,只适合尺寸较为均一的外泌体样本,并且无法测量样品中外泌体的浓度。
PEG沉淀法分离外泌体:通常通过将无水聚合物,如聚乙二醇(PEG),与样品混合来沉淀外泌体。PEG聚合物竞争性结合水分子,增加疏水性蛋白和脂质分子的相互结合力从而沉淀外泌体,然后通过离心分离外泌体。这种分离的方法快速,简便,可用于各种起始体积(从100μL到几毫升)适合于各种研究和临床设定。然而,这种方法缺乏选择性,PEG聚合物不只会导致外泌体小泡沉淀,还会引起其他细胞外囊泡、细胞外蛋白质和蛋白质聚集体沉淀。因此,在使用这种方法之前,必须进行样品预处理,例如过滤或超速离心,以减少较终的外泌体制剂的污染。超速离心法,这是目前外泌体提取较常用的方法。
流式细胞技术是细胞和小颗粒定性和定量表征的有效方法,其用于外泌体定量检测的准确性也在不断上升。将外泌体表面特异性标志物CD63、CD81等相应抗体进行标记,可用流式细胞仪检测到阳性表达,从而实现对外泌体的定量。但流式细胞技术检测时需要单颗粒悬浮液,当外泌体浓度高或分离过程中发生外泌体囊泡聚集时将导致一次观察到多个颗粒,从而导致数据不准确。因此,为了通过流式细胞仪观察,需要将外泌体通过免疫捕获或共价结合固定在磁珠表面上,从而便于将外泌体囊泡暴露于已知或者预期在外泌体表面表达的抗原的荧光偶联抗体中。在流式细胞术之前,可在落射荧光显微镜(EPI)下观察与磁珠和荧光抗体偶联的外泌体囊泡。当样品通过流式细胞仪时采集荧光信号,不只可以对外泌体进行高通量分析,还可以基于抗原表达对外泌体进行定量或分类。近年来,随着外泌体研究的不断深入,它的应用已经涉及医学基础和免疫领域、寄生虫领域。湖北干细胞外泌体
外泌体是一种存在于细胞外的多囊泡体,通过细胞内吞泡膜向内凹陷形成。细胞外泌体雾化
外泌体是分泌的细胞外囊泡的主要群体,是具有生物活性的脂双层囊泡,大小约为30-100nm,由不同类型的正常细胞和瘤子细胞自然产生和释放。这些囊泡在细胞间通讯中起重要作用,并影响细胞外环境和免疫系统反应。外泌体通过内体途径分泌到细胞外空间,并将各种生物活性分子(货物)转运至靶细胞。外泌体货物的组成非常多样化,包括各种免疫阻止和免疫刺激蛋白、趋化因子、细胞因子、细胞受体、脂质以及不同的核酸,例如miRNA和环状RNA。细胞外泌体雾化
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