MSCs在添加10%血小板裂解液和不同浓度肝素的培养基中培养7天，随后使用MTT法评估增殖。脂肪组织源性间充质干细胞（AT-MSC）和骨髓源性间充质干细胞（BM-MSC）培养的过程中，如果使用的UFH浓度低于0.61IU/mL或者使用Enoxaparin（LMWH）浓度低于0.024mg/mL(2.4IU/mL)时培养液均呈现凝胶状态（灰色背景），而肝素浓度过高则对细胞增殖的负面影响明显且以剂量依赖的方式提高。备注肝素浓度单位换算：肝素浓度国际单位(IU)衡量，1IU国际单位是指在规定的条件下，将1ml全血延长凝血3分钟所需的量：1mg大约相当于100IU的肝素。 在使用前需要过滤掉血小板裂解液中的沉淀吗？人血小板裂解液COA
通过BODIPY染色的脂肪滴来反映的成脂分化情况，发现两种肝素UFH和LMWH在高浓度时，分化成脂细胞的百分比明显降低。同样的，通过茜素红染色的磷酸钙沉淀分析成骨分化情况，高浓度肝素也降低了成骨分化的百分比，特别是在脂肪组织来源的MSCs中，UFH肝素高浓度对成脂和成骨分化诱导的负面影响较为明显。基于上述结果，我们现在知道血小板裂解液中添加的抗凝剂肝素在体外MSCs扩增的必要性，在购买血小板裂解液后，用户应结合自己的实验条件去合理的选择合适的肝素浓度，而肝素浓度的选择应该在有效防止含血小板裂解液培养基凝胶形成的基础上尽量降低，以减少肝素对于MSCs的增殖能力、成纤维细胞体外集落形成单位（CFU-F）、MSCs体外分化等的影响。 干细胞培养血小板裂解液等级血小板裂解液是由富含血小板的血浆纯化萃取而成,包含很多不同的细胞生长因子。
为了排除肝素对于细胞增长的抑制作用可能与防腐剂（这里采用苄醇作为防腐剂添加到UFH或LMWH中）有关。我们对不添加防腐剂的肝素进行了相同实验，结果对AT-MSC和BM-MSC细胞增殖抑制趋势相同。在随后的传代培养到3代中的累积的群体中，两种肝素UFH和LMWH对MSC增殖的影响也变得明显，血小板裂解液中肝素浓度较低时累积细胞群体倍增指数(cPD) 较高。CFU-F的塑料粘附生长性能是MSCs培养的先决条件，在96孔板中通过有限稀释的方法结合泊松统计进行CFU-F试验，显示集落形成率CFU-F在高浓度UFH时中度降低，而在高浓度Enoxaparin（LMWH）时明显降低。这些结果表明高浓度的LMWH减少了CFU-F的形成，这与已报道的其他研究结论一致。
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