蛋白纯化试剂产品介绍,Strep-tag是一种在蛋白纯化系统中应用***的亲和标签。它包括两种类型Strep-tagII和TwinStrep-tagII。Strep-tagII是一个短肽标签,由8个氨基酸(WSHPQFEK)组成,可以作为N端或C端标签与蛋白质融合,对重组蛋白的影响很小。进一步改进的TwinStrep-tagII是一个顺序排列的两个Strep-tagII序列(通过内部氨基酸连接),该标签能够像Strep-tagII一样进行温和、快速的纯化。这两个标签可以自由结合Streptactin和STarmSterptactin中的任一配体。标签/配体的结合取决于所需的结合强度和应用。这两个标签和Streptaction和STarmSterptaction的亲和力在μg/ml范围内,这种高亲和性是任何其他现有亲和性标记系统都无法实现的。此外,这种结合标签和配体的灵活性允许在生理条件下纯化重组蛋白。预制胶的使用注意事项。湖南蛋白检测试剂销售价格
蛋白纯化试剂抗体纯化rProteinA/GBeads4FF纯化流程:2.4.1抗体吸附1)取适量的rProteinA/GBeads4FF加入到2ml离心管中,800rpm离心1min,吸弃上清。2)加入0.5ml平衡液,悬浮填料(使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下,起到保护蛋白的作用),800rpm离心1min,吸弃上清。再重复两次。3)向步骤2)平衡的填料中加入抗体溶液,悬浮填料,室温下置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转离心管,约30min后,800rpm离心1min,收集上清液,留待检测。4)向3)的填料中加入0.5ml的洗杂液,悬浮填料,进行清洗,去除非特异性吸附的杂蛋白,800rpm离心1min,吸弃上清。再重复两次。2.4.2抗体交联(备选)如果需要将抗体和目标抗原复合物共同洗脱,请忽略本步骤,直接进行2.4.3。50ul-1ml填料量均可以按照以下步骤操作,无需额外增加交联液体积。1)向清洗过的填料中加入1ml交联液,800rpm离心1min,吸弃上清。2)再向其中加入1ml含20mMDMP(dimetylpimelimidatedihydrochloride)的交联液,此试剂需要现用现配,悬浮填料,在室温下置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转离心管,促使缓冲液和填料充分接触,约30min后,800rpm离心1min,吸弃上清。江西核酸提取试剂生产商预活化填料哪家有卖的?
蛋白纯化试剂抗体纯化rProtein A/G Beads 4FF纯化流程,样品准备上柱之前要确保样品溶液有合适的离子强度和pH值,可以用平衡/洗杂液对血清样品、腹水或细胞培养液稀释,或者样品用平衡/洗杂液透析。对于100mm培养皿中的贴壁细胞,吸除细胞培养液,使用预冷PBS洗涤一次后加入2ml细胞裂解液裂解细胞。对于悬浮细胞,离心收集细胞后,PBS洗涤一次后参考贴壁细胞的裂解方法进行裂解。植物或动物组织样品可以使用液氮研磨方法裂解。具体的裂解方法请参考不同裂解液的使用说明,裂解液**终总蛋白浓度选择在0.5-1μg/μl范围内较为合适。通常针对目标蛋白的表达量不同,需要对总蛋白浓度进行预实验调整。2.3.去除非特异性结合(可省略)1)取200微升至1毫升蛋白样品,加入约1微克和免疫沉淀时使用的IgG种属相同的3/5常州天地人和生物科技有限公司NormalIgG和20微升充分重悬的rProteinA/GBeads4FF,4℃缓慢摇动30分钟。2)2500rpm(约1000g)离心1分钟,取上清用于后续的免疫沉淀。注:哺乳动物细胞内有多种成分可以和IgG发生结合,可能会在后续免疫印迹中出现非特异性条带。使用normalIgG和rProteinA/GBeads4FF对裂解液预处理可以降低非特异性吸附。
蛋白纯化试剂.产品介绍,DextrinBeads是一种纯化带有麦芽糖结合蛋白(MBP)标签蛋白的亲和层析介质,具体性能见表1。MBP可促进连接蛋白的正确折叠,增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性,尤其是真**白。DextrinBeads可以一步纯化MBP融合蛋白,结合的融合蛋白可以用10mM麦芽糖进行温和洗脱,保护了标签蛋白的活性。如果要去除MBP融合部分可用位点特异性蛋白酶切除。问题及解决方案问题原因分析:柱子反压过高填料被堵塞按照第3部分进行树脂清洗。裂解液中含有微小的固体颗粒,建议上柱前使用滤膜(0.22或0.45μm)过滤,或者离心去除。目的蛋白没有吸附目的蛋白未表达确保目的蛋白表达样品或缓冲液中存在一些干扰因素如非离子去污剂样品透析或用结合液稀释细胞产生大量的淀粉酶影响结合力培养基中添加葡萄糖,抑制淀粉酶的表达融合蛋白使麦芽糖结合位点阻塞或扭曲,影响了目的蛋白的结合力更换载体柱子结合时间太短将样品与DextrinBeads振荡孵育4度2小时或更长时间洗脱样品较杂目的蛋白降解加一些蛋白酶抑制剂,如PMSF、EDTA等平衡/洗杂不充分增加平衡液体积,确保树脂充分平衡/洗杂,如树脂太脏按照第3部分进行树脂清洗核酸提取系列DNA Fragselect XP Magnetic Beads。
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常州天地人和纯化试剂CoSmartBeads6FF产品介绍,CoSmartBeads6FF是一种新型IMAC填料,螯合有非常牢固的Co离子,具体性能见表1。Co2+离子半径大于Ni2+,因此Co2+结合His标签能力小于Ni2+。CoSmartBeads6FF主要应用于分泌到真核培养液上清中的组氨酸标记蛋白的捕获和纯化,可以在含有EDTA及DTT的情况下进行目的蛋白高效的纯化。CoSmartBeads6FF有很强的组分兼容性,适用于***底物及盐浓度的缓冲条件,本信息由上海楚知生物科技有限公司提供湖南蛋白检测试剂销售价格
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