蛋白纯化仪蛋白纯化方法之离子交换技术：流动相的选择离子交换色谱的流动相必需是有一定离子强度的并对pH有一定缓冲能力的溶液。为了避免目的蛋白失活，使用缓冲液可稳定流动相的pH，使之在色谱过程中不发生明显变化，同时可稳定目的分子上的电荷量，保证色谱结果的重要性。选择缓冲液一般按照以下原则：阳离子交换剂应选用阴离子缓冲液，可用柠檬酸盐、磷酸盐、醋酸盐、甘氨酸盐等；阴离子交换剂应选用阳离子缓冲液，可用烷基胺、Tris、氨基乙醇胺、乙二胺、咪唑等；起始缓冲液的浓度应尽可能低（<100mmol/L）这样可以使色谱柱上更多的吸附分离物质；缓冲液应不含会影响被分离物质活性和溶解度成分，洗脱时尽量不采用pH梯度洗脱，色谱柱的选择，离子交换色谱通常选用粗短柱，即高径比小的色谱柱。典型的离子交换柱高度在5~20cm，高径比一般小于5。如果需要增加离子交换剂的体积，只能从增加柱的直径而不能增加其高度。如果是连续梯度洗脱，可以适当增加柱的长度。Unique AutoPrep高压制备液相色谱。江西性能优良蛋白纯化仪生产商
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蛋白纯化仪蛋白纯化方法之离子交换技术：案例介绍 6.选择比较好线速，用0.5mol/LNaOH冲洗柱，冲洗3~5体积；7.接着用超纯水冲柱，冲洗10柱体积，至pH显示接近超纯水pH。柱的平衡20mmol/L磷酸盐缓冲液，pH6.5，用10柱体积平衡缓冲液平衡柱子，直至pH及电导率监控显示与平衡缓冲液的pH及电导一致。加样根据柱体积及装柱的比较大流速确定上样流速，上样流速不超过装柱比较大流速的75%，同时，上样流速也要尽可能低，保证样品和介质充分发生作用。洗脱上样结束后，用平衡缓冲液冲洗1~2柱体积，使UV280响应信号重新回到基线。之后用含有0.5mol/LNaCL的溶液洗脱，冲洗2~3柱体积，收集色谱峰。
蛋白纯化仪蛋白纯化方法之离子交换技术：离子交换剂是由不溶于水的网状结构高分子聚合物骨架构成，骨架 上有许多共价结合的带电基团，如果侧链是带正电基团，就可与带 负离子相结合，称为阴离子交换剂，吸附带负电蛋白质。如果侧链是带负电的基团，则称为阳离子交换剂。强离子 交换树脂在宽 pH范围内保持离子化，而弱离子交换树脂只在窄 pH 值内离子化。绝大多数重组蛋白纯化都要用到离子交换。离子交换色谱的基础是高分辨率，可以直接放大规模应用在工业上，柱再生容易，还可以使蛋白浓缩。大多数蛋白质的静电荷是负值，因此阴离子交换色谱的应用**为***。快速纯化从微克到克水平的蛋白、肽和核酸等目标产物的蛋白纯化仪。
蛋白纯化仪，蛋白纯化方法之凝胶过滤色谱：2.凝胶介质的预处理凝胶在使用前应用水充分溶胀（胶：水=1：10），自然溶胀的耗时较长，可采用加热的方法使溶胀加速，即在沸水浴中将凝胶升温至沸，1~2h即可达到溶胀。在烧杯中将干燥凝胶加水或缓冲液，搅拌，静置，倾去上层混悬液，除去上清液中的凝胶碎块，重复数次，直到上清澄清为止。3.色谱柱的选择色谱柱的体积和高径比与色谱分离效果密切相关，凝胶柱床的体积、柱长和柱的直径以及柱比的选择必须根据样品的数量，性质和分离目的进行确定。组别分离时，大多采用2~30cm长的色谱柱，柱床体积为样品溶液体积的5倍以上，柱比一般在5~10之间；而分级分离一般需要100cm左右的色谱柱，并要求柱床体积大于样品体积25倍以上，柱比在20~100之间。英赛斯Unique AutoPrep高压制备液相色谱。湖北性能优良蛋白纯化仪厂家批发价
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