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蛋白纯化仪蛋白纯化方法之离子交换技术:离子交换剂是由不溶于水的网状结构高分子聚合物骨架构成,骨架 上有许多共价结合的带电基团,如果侧链是带正电基团,就可与带 负离子相结合,称为阴离子交换剂,吸附带负电蛋白质。如果侧链是带负电的基团,则称为阳离子交换剂。强离子 交换树脂在宽 pH范围内保持离子化,而弱离子交换树脂只在窄 pH 值内离子化。绝大多数重组蛋白纯化都要用到离子交换。离子交换色谱的基础是高分辨率,可以直接放大规模应用在工业上,柱再生容易,还可以使蛋白浓缩。大多数蛋白质的静电荷是负值,因此阴离子交换色谱的应用**为***。甘肃通用蛋白纯化仪代理厂家蛋白纯化方法之凝胶过滤色谱。
蛋白纯化仪,蛋白纯化方法之凝胶过滤色谱:2.凝胶介质的预处理凝胶在使用前应用水充分溶胀(胶:水=1:10),自然溶胀的耗时较长,可采用加热的方法使溶胀加速,即在沸水浴中将凝胶升温至沸,1~2h即可达到溶胀。在烧杯中将干燥凝胶加水或缓冲液,搅拌,静置,倾去上层混悬液,除去上清液中的凝胶碎块,重复数次,直到上清澄清为止。3.色谱柱的选择色谱柱的体积和高径比与色谱分离效果密切相关,凝胶柱床的体积、柱长和柱的直径以及柱比的选择必须根据样品的数量,性质和分离目的进行确定。组别分离时,大多采用2~30cm长的色谱柱,柱床体积为样品溶液体积的5倍以上,柱比一般在5~10之间;而分级分离一般需要100cm左右的色谱柱,并要求柱床体积大于样品体积25倍以上,柱比在20~100之间。
上海楚知生物Unique AutoPure®蛋白纯化仪蛋白纯化方法之离子交换技术:常见问题分析一、纯化后样品纯度不高怎么办?1.若目标蛋白和杂蛋白等电点差异较大,目标蛋白通过穿透步骤获得,通过调节起始缓冲液pH,使目标蛋白与填料之间的静电作用更强;若目标蛋白和杂蛋白等电点差异较小,目标蛋白通过洗脱步骤获得,过调节起始缓冲液pH,使目标蛋白与填料之间的静电作用更强;再调节洗脱溶液的离子强度和pH,使目标蛋白与杂蛋白逐渐分离;选择合适的离子交换填料及粒径;柱没有经过起始缓冲液的充分平衡;降低洗脱流速;调整样品溶液黏度。手动收集、全自动组分收集以及大体积收集模式样品的蛋白纯化仪。
蛋白纯化仪,纯化方法之凝胶过滤色谱:3、分辨率不高提高装柱质量,使色谱柱装填匀实;提高柱床高度;控制上样体积,比较大上样体积不超过柱床体积5%;控制样品黏度与洗脱溶液黏度保持一致;根据样品特点选择合适的洗脱溶液,调节洗脱溶液的离子强度或亲水性;选择合适的凝胶柱(如何选择请参照上文)4、色谱峰对称性差提高装柱质量,装柱匀实——若柱装的太松,容易引起拖尾,装的太紧,会引起前沿;柱较脏,再生色谱柱5、峰出现的原因及解决方法柱床松动,重新装柱或反向冲洗柱柱筛板堵塞,超声清洗筛板柱干裂,重新装柱性能稳定,精密度高的蛋白纯化仪系统。湖南通用蛋白纯化仪哪里买
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以下是蛋白质纯化常用到的实验设备,*供参考。(1)、超声波细胞破碎机适用于5-100g湿菌体超声破碎,实验室规模用。(2)、高压匀浆机大规模生产用,对菌体量无限制。破菌效果好,但要注意冷却。(3)高分散乳化机均匀悬浮菌体用,比搅拌快,均匀性好,特别适合于大规模生产。另外,大规模生产时缓冲液的配制很有用,可快速溶解、混匀。(4)、中空纤维超滤柱大规模生产时做菌体收集用,要配合大蠕动泵及压力表。(5)、高速冷冻离心机小试、中试菌体收集用,破菌后离心,包涵体溶解后离心、小规模离心超滤等。(6)、磁力搅拌器就是搅拌用了。缓冲液配制,包涵体溶解等。(7)、真空泵离心上清过滤、缓冲液过滤、样品过滤等。(8)、过滤器同真空泵配合使用。(9)、pH计缓冲液配制、样品pH调节用。(10)电导仪就是测定缓冲液及样品的电导了。(11)、纯水仪如果没有管道系统的纯水设备,那就必需要的了。至少也是要去离子水、双蒸水或三蒸水。(12)紫外可见分光光度计测定蛋白浓度。岛津(13)、核酸蛋白检测仪纯化时在线监测。(14)、蠕动泵简单纯化系统用、包涵体稀释复性。(15)、纯化系统高级的纯化系统了。推荐品牌:Unique Autopure 蛋白纯化系统。河南高级蛋白纯化仪要多少钱
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