蛋白纯化仪蛋白纯化方法之离子交换技术:案例介绍,离子交换是蛋白纯化中的重要手段,即可以用于捕获阶段,也可以用于精纯阶段。预处理和装柱1.将超纯水与沉降胶按1:3比例悬浮,轻轻搅匀;2.将色谱柱固定到设备支架上,链接出口管道,从柱底端进口反向泵入超纯水,排除管道及筛板中的气泡,停泵,然后从出口端放出部分超纯水,保留1~2cm高度超纯水,封死出口端,然后正向冲洗进口端管道和适配器,排除筛板和管道中气泡;3.通过玻璃棒引流将悬浮胶导入色谱柱,在柱上端补充部分超纯水,搅匀,装上适配器;4.将柱出口端与色谱设备连接,以0.2MPa恒压装柱,装填至恒定的柱床高度,标记柱床胶面位置,关闭泵,松开适配器,降低适配器至胶面下2mm处,继续装填,待柱床高度稳定后,标记柱床胶面位置,降低适配器至柱上标记柱床位置下2mm。固定适配器,继续装填2~3柱体积;5.确定柱体积,测量柱高,计算柱体积及记录装柱时的比较大流速;蛋白纯化系统多少钱?江苏全自动蛋白纯化仪咨询问价
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蛋白纯化仪蛋白纯化方法之离子交换技术:案例介绍 6.选择比较好线速,用0.5mol/LNaOH冲洗柱,冲洗3~5体积;7.接着用超纯水冲柱,冲洗10柱体积,至pH显示接近超纯水pH。柱的平衡20mmol/L磷酸盐缓冲液,pH6.5,用10柱体积平衡缓冲液平衡柱子,直至pH及电导率监控显示与平衡缓冲液的pH及电导一致。加样根据柱体积及装柱的比较大流速确定上样流速,上样流速不超过装柱比较大流速的75%,同时,上样流速也要尽可能低,保证样品和介质充分发生作用。洗脱上样结束后,用平衡缓冲液冲洗1~2柱体积,使UV280响应信号重新回到基线。之后用含有0.5mol/LNaCL的溶液洗脱,冲洗2~3柱体积,收集色谱峰。
蛋白纯化仪蛋白纯化方法之离子交换技术:流动相的选择离子交换色谱的流动相必需是有一定离子强度的并对pH有一定缓冲能力的溶液。为了避免目的蛋白失活,使用缓冲液可稳定流动相的pH,使之在色谱过程中不发生明显变化,同时可稳定目的分子上的电荷量,保证色谱结果的重要性。选择缓冲液一般按照以下原则:阳离子交换剂应选用阴离子缓冲液,可用柠檬酸盐、磷酸盐、醋酸盐、甘氨酸盐等;阴离子交换剂应选用阳离子缓冲液,可用烷基胺、Tris、氨基乙醇胺、乙二胺、咪唑等;起始缓冲液的浓度应尽可能低(<100mmol/L)这样可以使色谱柱上更多的吸附分离物质;缓冲液应不含会影响被分离物质活性和溶解度成分,洗脱时尽量不采用pH梯度洗脱,色谱柱的选择,离子交换色谱通常选用粗短柱,即高径比小的色谱柱。典型的离子交换柱高度在5~20cm,高径比一般小于5。如果需要增加离子交换剂的体积,只能从增加柱的直径而不能增加其高度。如果是连续梯度洗脱,可以适当增加柱的长度。性能稳定,精密度高的蛋白纯化仪系统。
上海楚知生物Unique AutoPure®蛋白纯化仪蛋白纯化方法之离子交换技术:常见问题分析二、纯化后的蛋白收率较低怎么办?调整样品pH,使样品pH与起始缓冲液pH保持一致;改变洗脱模式,如将线性梯度模式改变为阶段性梯度洗脱;改变洗脱方法,如将pH洗脱方法改为盐梯度洗脱方法;改变洗脱强度。三、样品过于粘稠怎么处理?样品过于粘稠可能是由于含有的蛋白太多,或者含有大分子量的核酸分子,通常有以下解决方法:增加裂解前稀释细胞所用体积;增加裂解时间,直至黏度下降,或者增加DNase和Mg2+的剂量;增加机械裂解细胞的效率;降低上样流速。蛋白纯化方法之离子交换术。系统稳定蛋白纯化仪咨询问价
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以下是蛋白质纯化常用到的实验设备,jin供参考(15)、纯化系统高级的纯化系统了。推荐品牌:Unique Autopure 蛋白纯化系统。(16)、膜超滤器蛋白样品浓缩、缓冲液置换、以及药品级蛋白纯化时缓冲液的去内毒su用。(17)、蛋白电泳仪SDS-PAGE、Westblot用。(18)脱色摇床电泳染色、脱色用。(19)、制冰机破菌时冷却用。(20)、恒温培养箱融合蛋白酶切去除tag时恒温用,做ELISA时用。(21)、凝胶成像仪就是给电泳胶及WB拍照片用,要配照片打印机哦。就是一台数码相机,硬件各品牌没有本质差异,主要看那家的软件做的好,界面友好。(22)、电磁炉加热电泳样品。(23)、微波炉电泳考染脱色。加热水,溶解尿素、硫酸铵等。(24)、微量取样器就是qiang了。从1ul到5ml都要的。还有一种电动的,可以用刻度吸管。江苏全自动蛋白纯化仪咨询问价
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